HemaBook. Глава 2. Еще один вариант решения проблемы ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении?

Псевдотромбоцитопения, индуцированная этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА) — это лабораторный артефакт, который может привести к неправильной оценке состояния пациентов и назначению им ненужного лечения.

Какой (какие) из следующих методов следует использовать, чтобы скорректировать количество тромбоцитов в случае тромбоцитопении, вызванной ЭДТА-индуцированной агрегацией тромбоцитов?

• Повторно проверить мазок крови и оценить количество тромбоцитов
  
• Повторно проверить с добавлением амикацина
  
• Повторно проверить после нагревания при 37 °C
  
• Сразу же повторно проверить разведение без антикоагулянтов
  
• Повторно проверить на другом гематологическом приборе
  
• Повторно проверить с другими антикоагулянтами
   

Опытные врачи клинических лабораторий, на которых возлагается повышенная ответственность, всегда стремятся к точности и достоверности результатов. На сегодняшний день были проведены некоторые клинические исследования, нацеленные на поиск решений проблемы ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении. Было установлено, что гематологические системы Mindray с технологией SF Cube идеально подходят для определения количества тромбоцитов в лабораторных условиях.

Отчет о клиническом случае

Пациентка — 32-летняя женщина с бесплодием. После взятия образца ЭДТА-антикоагулированной крови пациентки он был проанализирован через 55 минут, и в результате был выявлен низкий уровень тромбоцитов (28 × 10⁹/L). Тест был проведен импедансным методом (PLT-I) на гематологической системе популярного бренда (устройство А). Агрегация тромбоцитов подтверждена микроскопическим исследованием мазка, что указывает на псевдотромбоцитопению. Вскоре после этого был проведен повторный анализ этого образца методом CDR(PLT-O) с использованием Mindray BC-6800Plus. Результаты показали заметно большее количество тромбоцитов: 180 × 10⁹/L.

Предполагается, что низкое количество тромбоцитов, полученное на устройстве А, связано с ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопенией. Далее пациентку попросили дать согласие на проведение дополнительного теста, на этот раз — с добавлением цитрата натрия в пробирку с образцом крови. Через 30 минут после взятия образец был проанализирован. Полученные параметры тромбоцитов в образцах крови были изучены с использованием разных методов и устройств тестирования, перечисленных в Таблице 1.

Дальнейшее сравнение других образцов

При изучении мазка крови под микроскопом в ЭДТА-антикоагулированной крови была обнаружена агрегация тромбоцитов, а в цитрат-антикоагулированной крови — нет. В соответствии с инструкциями производителя образцы крови анализировались в течение четырех часов с момента сбора. Помимо данных этой пациентки, были собраны и оценены данные еще по пяти случаям ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении (Таблица 2).

По завершении автор делает вывод: для пациентов с установленной ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопенией или с подозрением на нее технология Mindray SF-Cube представляет собой простой и эффективный метод определения количества тромбоцитов в ЭДТА-антикоагулированной крови.

Идентификация и характеристики образцов ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении

Образцы, для которых на гематологическом анализаторе появился значок «Агрегация PLT», продемонстрировали типичную нерегулярность с зазубринами и зигзагообразный хвост (Рис. 1) на гистограмме тромбоцитов. Кроме того, при изучении под микроскопом не обнаружено сателлитизма тромбоцитов или гигантских тромбоцитов.

Ложное низкое количество тромбоцитов в BC-6800, подсчитанное оптическим методом (PLT-O)

23 образца ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении в пробирках ЭДТА (с агрегацией тромбоцитов) были протестированы в импедансном (PLT-I (ЭДТА)) и ретикулоцитарном канале Mindray BC-6800 (PLT-O (ЭДТА)). Интересно то, что результаты PLT-O (ЭДТА) были сопоставимы с количеством тромбоцитов для повторно отобранных образцов в цитратных трубках (PLT-I (Citrate)), что доказывает, что метод PLT-O (ЭДТА) может быть с точностью адаптирован к проблеме агрегации тромбоцитов, вызванной ЭДТА (Рисунок 2).

Влияние диссоциации — ЭДТА-индуцированная псевдотромбоцитопения в гематологической системе популярного бренда:доступно с флуоресцентным красителем?

Оптический флуоресцентный подсчет тромбоцитов доступен как в гематологических анализаторах высокого класса (устройство В), так и в гематологических анализаторах серии Mindray BC-6000. В этом методе используется флуоресцентный краситель для окрашивания нуклеиновых кислот в тромбоцитах, позволяющий распознавать крупные тромбоциты, исключая частицы, не являющиеся ими, такие как осколки эритроцитов, микроэритроциты или лейкоциты.

Для проверки того, зависит ли влияние диссоциации от флуоресцентного окрашивания при подсчете тромбоцитов оптическим флуоресцентным методом, 17 из 23 образцов ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении в ЭДТА-трубках были также протестированы в ретикулоцитарном и импедансном каналах устройства В. Было обнаружено, что нет значительной разницы между подсчетом тромбоцитов в ретикулоцитарном и импедансном канале (Рис. 3). Только один из 17 образцов ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении продемонстрировал диссоциацию более 80 % при средней степени диссоциации 56% для всех 17 образцов ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении (Рис. 3).

Заключение

В заключение автор делает вывод: подсчет тромбоцитов оптическим флуоресцентным методом в гематологическом анализаторе BC-6800 эффективен для коррекции ложного низкого количества тромбоцитов у пациентов с ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопенией, а влияние диссоциации на образцы ЭДТА-индуцированной псевдотромбоцитопении не зависит от окрашивания флуоресцентным красителем.

В повседневной работе лабораторий псевдотромбоцитопения является неизбежной проблемой. Технология Mindray SF Cube являет собой эффективный метод PLT-O (основанный на флуоресцентном окрашивании нуклеиновой кислотой на канале RET) для коррекции количества тромбоцитов при псевдослучайном снижении их количества в связи с ЭДТА. Метод PLT-O доступен в автоматическом гематологическом анализаторе серии Mindray BC-6000 и системе цитологического анализа CAL 8000/6000.

Список литературы:

[1] J. Deng, et al. Mindray SF-Cube technology: An effective way for correcting platelet count in individuals with EDTA dependent pseudo thrombocytopenia. Clinica Chimica Acta 502 (2020) 99–101

[2] Y. Bao, et al. Correction of spurious low platelet counts by optical fluorescence platelet counting of BC-6800 hematology analyzer in EDTA-dependent pseudo thrombocytopenia patients. Transl Cancer Res 2020;9(1):166-172