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HemaBook, chapitre 5 : Comment Mindray compte correctement les faibles plaquettes

Mindray 2021-01-06

Portée clinique

Dérivées des mégacaryocytes, les plaquettes (PLT) sont produites et maturées dans la moelle osseuse. Outre la thrombose et la réparation des plaies largement connues, les plaquettes jouent également un rôle important dans la biologie de l'inflammation, de l'immunité et du cancer[1]. Les intervalles de référence normaux des plaquettes dans le sang périphérique varient entre 150 et 400×109/L. Lorsque cette valeur est inférieure à 100×109/L, il peut en résulter un problème clinique courant identifié comme une thrombocytopénie (faible taux de plaquettes)[2].

Il existe plusieurs causes de thrombocytopénie, notamment une diminution de la production des plaquettes, une augmentation de la destruction des plaquettes, une augmentation de la séquestration et de la dilution splénique[3]. Actuellement, l'hémogramme complet (CBC) et l'examen de frottis sanguins sont des méthodes de diagnostic essentielles pour l'évaluation initiale des échantillons de thrombocytopénie[2]. Par conséquent, le comptage correct des faibles taux de plaquettes par un analyseur d'hématologie automatique pourrait être une approche prospective qui réduirait considérablement le taux de frottis sanguins et ferait gagner un temps précieux au laboratoire de diagnostic, en dépistant rapidement les échantillons de thrombocytopénie.

Cependant, le comptage correct des faibles taux de plaquettes n'est pas un processus simple. Comment l'analyseur d'hématologie automatique haut de gamme de Mindray traite-t-il les échantillons à faible taux de plaquettes ?

Solution Mindray

Tech. 1. Coloration fluorescente hautement spécifique

Le colorant fluorescent (colorant FR) a été spécialement conçu avec la capacité d'identifier immédiatement les cellules cibles. Ensuite, la molécule fluorescente capture l'acide nucléique dans les cellules plaquettaires tout en évitant les interférences des petits fragments de globules rouges (GR) ou globules blancs (GB) et autres petites particules. Les plaquettes colorées avec un colorant fluorescent spécifique passent ensuite par le détecteur laser pour une mesure optique. La spécificité et l'affinité élevées du colorant fluorescent garantissent que la liaison à l'intérieur des cellules plaquettaires est suffisamment stable pour que les cellules puissent traverser le laser. Ainsi, même de faibles quantités de plaquettes peuvent être cartographiées et comptées avec précision dans le diagramme de dispersion SF CUBE 3D.

Tech. 2. Détection optique à haute résolution

De plus, l'analyseur d'hématologie haut de gamme de Mindray combine la technologie de suppression de la lumière réfléchie avec le SiPM (photomultiplicateur au silicium), qui est très sensible aux signaux de fluorescence tout en minimisant le bruit de fond lors de la détection optique. Cela améliore considérablement la limite de détection des particules, et la limite inférieure pour les petites particules atteignant jusqu'à 1 µm (un diamètre de 2 µm est défini comme petite plaquette), garantissant que les résultats de l'échantillon ne sont pas interférés par des plaquettes ou particules de petite taille.

Tech. 3. Désagrégation des plaquettes

La pseudothrombocytopénie est causée par l'agglutination in vitro des plaquettes dans un tube de prélèvement sanguin avec anticoagulant (EDTA), ce qui peut entraîner une numération des plaquettes faussement faible[4]. La R&D de Mindray a mené des études préliminaires axées sur les mécanismes d'activation des plaquettes, qui sont principalement régulés par le canal calcique, la voie de la tyrosine kinase et les anticorps GPIIb/IIIa. Ensuite, des antagonistes sont appliqués dans le diluant DR pour bloquer directement les sites de liaison à la surface des plaquettes, ce qui minimise considérablement la formation d'amas plaquettaires. Un mécanisme de désagrégation des plaquettes plus détaillé sera décrit dans le prochain chapitre du HemaBook.

Figure 4. Numération Auto 8×PLT-O

Mindray est en cours de dépôt d'une demande de brevet (voir l'image ci-dessous) pour la technologie de numération Auto 8×PLT-O. Pour commencer, la valeur PLT-I obtenue à partir du canal d'impédance est d'abord comparée à une valeur par défaut (50×109/L). Si cette valeur est inférieure à la valeur limite, l'analyseur peut automatiquement prolonger le temps de comptage jusqu'à 8 fois afin de collecter plus de particules plaquettaires pour une analyse plus approfondie. En outre, la technique de numération Auto 8×PLT-O peut éliminer d'autres facteurs d'interférence (p. ex., des fragmenté de GR/GB) qui sont souvent faussement numérisés comme PLT par le canal d'impédance. Pas d'échantillonnage supplémentaire, pas d'intervention manuelle, pas de canaux ni de réactifs supplémentaires ne sont nécessaires. La numération 8×PLT-O est à la fois efficace et performante pour le comptage correct des faibles taux de plaquettes.

N° IPC

Titre : MÉTHODE ET DISPOSITIF DE DÉTECTION DU SANG

Préparer une première solution de détection à partir d'un échantillon de sang.
Contrôler que la première solution de détection à traverser une zone de détection d'impédance.
Effectuer la détection des plaquettes sur la première solution de détection dans la zone de détection de l'impédance par une méthode d'impédance pour obtenir un premier résultat de détection des plaquettes.
Préparer une deuxième solution de détection à partir de l'échantillon de sang lorsque le premier résultat de détection des plaquettes est inférieur à un seuil de détection préétabli.
Contrôler que la deuxième solution de détection à traverser une zone de détection d'impédance.
Effectuer la détection des plaquettes sur la deuxième solution de détection dans la zone de détection de l'impédance par la méthode d'impédance pour obtenir un deuxième résultat de détection des plaquettes.

Références :

[1] Thrombocytopenia, Eun-Ju Lee, et al, Prim Care Clin Office Pract 43 (2016) 543–557.
[2] Platelet disorders: an overview, M. Krishnegowda, et al, Blood Coagulation and Fibrinolysis, 2015, Vol 26 No 5.
[3] Thrombocytopenia: an update, K. J. Smock, et al, Int. Jnl. Lab. Hem. 2014, 36, 269–278.
[4] Pseudothrombocytopenia, M Blonska, et al, Wiad Lek. 2001;54(5-6):333-6.